GB/T14701-2019飼料中維生素B2的測定內容是什么?百檢網檢測范圍廣泛，可根據客戶需求選擇合適的檢測標準及項目安排檢測，全國近千家合作實驗室，CMA/CNAS資質齊全，可就近安排寄樣檢測。今天百檢網就給大家簡單介紹一下GB/T14701-2019飼料中維生素B2的測定標準內容。

1 范圍

本標準規定了飼料中維生素B2(即核黃素C17H20N10)測定的熒光分光光度法和高效液相色譜法。

本標準方法1適用于動物性和植物性飼料原料、配合飼料、濃縮飼料中維生素B2的測定，定量限為0.25mg/kg。

本標準方法2適用于維生素預混合飼料、復合預混合飼料、濃縮飼料中維生素B2的測定，以熒光檢測器檢測時，定量限為5mg/kg;以紫外檢測器檢測時，定量限為10mg/kg。

濃縮飼料中維生素B2的測定，方法1為仲裁法；維生素預混合飼料、添加劑預混合飼料中維生素B2的測定，方法2中的高效液相色譜熒光檢測器方法為仲裁法。

2 規范性引用文件

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GB/T 6682 分析實驗室用水規格和試驗方法

GB/T 14699.1 飼料采樣

GB/T 20195 動物飼料試樣的制備

3 方法1 熒光分光光度法

3.1 原理

維生素B2(核黃素)在440nm紫外光激發下產生綠色熒光，在一定濃度范圍內其熒光強度與核黃素含量成正比。用連二亞硫酸鈉還原核黃素成無熒光物質，由還原前后熒光強度之差與熒光強度的比值計算樣品中維生素B2的含量。

3.2 試劑或溶液

除非另有說明，所用試劑均為分析純試劑，水為蒸餾水，符合GB/T 6682 中三級用水或相當純度的水。

3.2.1 氫氧化鈉溶液：0.05mol/L。

3.2.2 氫氧化鈉溶液：1.0mol/L。

3.2.3 鹽酸溶液：0.1mol/L。

3.2.4 鹽酸溶液：1.0mol/L。

3.2.5 連二亞硫酸鈉(Na2S2O4)。

3.2.6 高錳酸鉀溶液：40g/L。

3.2.7 冰乙酸。

3.2.8 冰乙酸溶液，0.02mol/L：將1.8mL冰乙酸用水稀釋至1000ml。

3.2.9 過氧化氫溶液，100mL/L，分析當天制備。

3.2.10 維生素B2標準溶液

3.2.10.1 維生素B2貯備液Ⅰ：稱取在五氧化二磷干燥器里干燥24h的維生素B2標準品(純度大于95%)25mg(*至0.0001g)于250mL棕色錐形瓶中，加入約200mL冰乙酸溶液(3.2.8)，在沸水浴中煮沸直至溶解，冷卻后轉移至250mL棕色容量瓶中，用冰乙酸溶液(3.2.8)稀釋至刻度。滴加甲苯覆蓋，2℃~8℃冰箱保存，保存期6個月。該溶液含0.1mg/mL維生素B2。

3.2.10.2 維生素B2貯備液Ⅱ：取維生素B2貯備液Ⅰ(3.2.10.1)10mL用冰乙酸溶液(3.2.8)稀釋至100mL，置于棕色容量瓶中滴加甲苯覆蓋，2℃~8℃冰箱保存，保存期3個月。該溶液中含10μg/mL維生素B2。

3.2.10.3 維生素B2標準工作液：取維生素B2貯備液Ⅱ(3.2.10.2)10mL，用水稀釋至100mL，分析前制備。該溶液中含1μg/mL維生素B2。

3.2.11 熒光素標準溶液

3.2.11.1 熒光素貯備液：稱取熒光素0.050g，用水稀釋至1000mL，置于棕色瓶中2℃~8℃冰箱保存。該溶液中含50μg/mL熒光素。

3.2.11.2 熒光素標準工作液：取1mL熒光素貯備液(3.2.11.1)，用水定容至1000mL，置于棕色瓶中2℃~8℃冰箱保存。該溶液中含0.05μg/mL熒光素。

3.2.12 溴甲酚綠pH指示劑

取溴甲酚綠0.1g，加氫氧化鈉溶液(3.2.1)2.8mL溶解，再加水稀釋至200mL。變色范圍pH3.6~5.2。

3.3 儀器設備

3.3.1 分析天平：感量0.0001g。

3.3.2 電熱恒溫水浴

3.3.3 具塞玻璃刻度試管：15mL。

3.3.4 熒光分光光度計。

3.4 試樣制備

按GB/T 14699.1 的規定，選取具有代表性的樣品至少500g，用四分法縮減至100g；按GB/T 20195 的規定制備樣品，磨碎，通過0.425mm孔篩，混勻，裝入密閉容器中，避光低溫保存備用。

3.5 試驗步驟

以下操作應避免強光照射。

3.5.1 試樣溶液的制備

稱取飼料原料、配合飼料、濃縮飼料1g~2g(*至0.001g)置于100mL棕色具塞錐形瓶中。加入65mL鹽酸溶液(3.2.3)，于沸水浴中煮沸30min。在加熱開始時，每隔5mi~10min搖動錐形瓶一次，以防試樣結塊。冷卻至室溫后，用氫氧化鈉溶液(3.2.2)調節pH值至6.0~6.5，立即加鹽酸溶液(3.2.4)使pH值調至4.5(溴甲酚綠指示劑變為草綠色)。轉移至100mL棕色容量瓶中，用水稀釋至刻度。通過中速無灰濾紙過濾，棄去*初5mL~lomL溶液，收集濾液于100mL棕色錐形瓶中。取整份清液，滴加稀鹽酸檢査蛋白質，如有沉淀生成，繼續加氫氧化鈉溶液，劇烈振搖使之沉淀完全。再次過濾作為待測試液。

3.5.2 雜質氧化

于a、b、c三支15mL刻度試管(3.3.3)中各吸入試樣溶液(3.5.1)lomL，同時做平行，向試管a中加入水1mL，向試管b中加入維生素B2標準工作液(3.2.10.3)1mL。然后各加入冰乙酸(3.2.7)1mL旋搖混勻后逐個加高錳酸鉀溶液(3.2.6)0.5mL，旋搖混勻，靜置2min，再逐個加入過氧化氫溶液(3.2.9)0.5mL旋搖，使高錳酸鉀顏色在10s內消退。加蓋搖動，使氣泡逸出。

3.5.3 測定

用熒光素標準工作液(3.2.11.2)調整熒光儀，使其穩定于一定數值，作為儀器工作的固定條件。調整激發波長440nm，發射波長525nm，測定試管a、試管b的熒光強度，試樣溶液在儀器中受激發照射不超過10s；在試管c中加入20mg連二亞硫酸鈉(3.2.5)，搖動溶解，并使試管中的氣體逸出，迅速測定其熒光強度作為熒光空白。若溶液出現渾濁，不能讀數。

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